化學小學堂 – 胺基酸合成 / 胜肽合成 Q&A

Q1：胺基酸合成/胜肽合成和一般的化學合成沒有太大差別，為了節省時間及成本可以到最後再進行純化就好了！

A1：不行喔！胜肽合成的特點是其副產物（合成序列錯誤的胜肽）分離鑑定非常困難，甚至在 HPLC 上也未必能顯示出可辨別的不同波峰，

且胜肽分子具有熱穩定性不佳，對 pH 值變化敏感，容易氧化（序列含 Cys， Met）等特點，若原料品質不佳，而造成產物的低產率及低純度，

不但影響後續生物活性測試的準確性，而且純化的難度會佔用研究人員大量的人力、時間及金錢，所造成的損失可能是您當初沒有估算到的。

Q2：胺基酸的規格（Specification）只要看純度就可以了嗎？

A2：這樣還不夠喔！純度只是最基本的要求，但胺基酸原料仍有其他重要因素會影響合成胜肽時的效果。

例如二胜肽（Dipeptides），游離胺基酸（Free amino acid），鏡像物純度（Enantiomeric purity），

乙酸乙酯（Ethyl acetate），醋酸根（Acetate）殘留量等，都會影響到胜肽合成的結果，特別是當合成序列較長的胜肽時，影響會更加顯著。

例如：鏡像異構物(enantiomers)

一般HPLC管柱是無法分離D-胺基酸和L-胺基酸的，因此少量的鏡像不純物很容易被忽略掉，造成最終產物純度不佳，但使用者卻找不出問題在哪裡的窘境。(表一)

Effect of Amino acid enantiomeric purity on peptide purity

(表一) 鏡像異構物含量對胜肽純度的影響。

例如：醋酸根及乙酸乙酯(aetate & ethyl acetate)

Fmoc-氨基酸可能含有微量乙酸，會在合成過程中導致進行偶合時，因胺基酸連接上醋酸根導致胜肽鏈異常終止(capping)。

Novabiochem®規範產品的醋酸含量≤0.02%，且可產生醋酸根的乙酸乙酯規範為≤ 0.5%。(圖一及圖二所示)

(圖一) 醋酸根對胜肽合成的影響:增加不完全合成的胜肽片段。

(圖二) 乙酸乙酯產生醋酸根。

更詳細的說明請見我們的型錄

Q3：我應該選用哪種樹酯來進行固相胜肽合成（SPPS）呢？

A3：一般胜肽合成會由N端來延伸肽鏈。若是目標胜肽末端（C 端）為羧酸（carboxylic acid）可選用最常用的 Wang resin；

若是末端（C 端）為醯胺（amide）的胜肽，則可以選擇 Rink Amide AM Resin 或 Rink Amide MBHA Resin；此外2-Cl Trt Resin也很常被用來合成胜肽片段。

【化學小學堂】你可能不知道的 EDTA 小常識